诺丽酵素果汁在重度吸烟者体内的抗氧化活性研究
·抗氧化活性·诺丽的保健功效—国际最新研究进展论；ChemistryCentralJournal,；诺丽果汁在重度吸烟者体内的抗氧化活性研究；诺丽果汁在重度吸烟者体内的抗氧化活性研究；Mian-YingWanga,MNawalLut；SufandBrettJWestf；(aUIC医学院病理系，罗克福德，美国；b曼尼托；美国)；摘要：；[研究方法]诺丽果汁经动
·抗氧化活性· 诺丽的保健功效—国际最新研究进展论文集
Chemistry Central Journal, 2009, 3: 13-17.
诺丽果汁在重度吸烟者体内的抗氧化活性研究
Mian-Ying Wanga, M Nawal Lutfiyyab,c, Vicki Weidenbacher-Hoperd, Gary Andersone, Chen X
Suf and Brett J Westf
(aUIC医学院病理系，罗克福德，美国；b曼尼托巴大学社区健康科学学院医学系，温尼伯，加拿大；c温尼伯地区保健局，温尼伯，加拿大；dUIC医学院家庭及社区医学系，罗克福德，美国；eUIC医学院病理学系，罗克福德，美国；f巴戟天控股有限公司研究发展部，普罗沃，美国)
摘要：
[研究方法]诺丽酵素果汁经动物体外和体内试验显示具有抗氧化活性。本研究以285名重度吸烟者为研究对象，以常用的安慰剂为临床对照试验，对诺丽酵素果汁在人体中的抗氧化活性进行了为期30天的临床研究。参与研究的重度吸烟者被随机分为3个小组，即对照组（每日摄取118 mL安慰剂）、实验组1（每日摄取29.5 mL诺丽果汁）、实验组2（每日摄取29.5 mL诺丽果汁），并对三个组实验前后血液中超氧阴离子自由基（SAR）和脂质过氧化物（LOOH）含量进行测定与比较。[研究结果]经过30天的临床实验，发现实验组2的供试者体内的SAR平均由0.26 ± 0.14μmol/mL下降至0.19 ± 0.10 μmol/mL，LOOH平均由0.53 ± 0.19μmol/mL下降至0.40 ± 0.10 μmol/mL；实验组3的供试者体内的SAR平均由0.26 ± 0.22μmol/mL下降至0.18 ± 0.11 μmol/mL，LOOH平均由0.55 ± 0.21μmol/mL下降至0.40 ± 0.14 μmol/mL；而在对照组供试者体内SAR和LOOH含量没有发生明显的变化。[研究结论]诺丽果汁在重度吸烟者体内具有抗氧化活性，与该研究领域先前相关的研究结果相符。
1前言
吸烟会导致人体产生大量的氧离子自由基，引发一系列与吸烟相关的疾病。据研究统计，人们每吸一口烟，大约会产生1017个氧化分子，这些氧化分子在体内被激发活化，形成血液中的脂质过氧化产物，如脂质过氧化物（LOOH）及超氧化物阴离子自由基(SAR)。由此可见，吸烟会大大增加血液中脂质过氧化物（LOOH）及超氧化物阴离子自由基(SAR)的含量。诱导脂质过氧化过程在很大程度上依赖于细胞膜上多不饱和脂肪酸的自由基反应，不饱和键自催化或酶解进一步形成脂质过氧化物。脂质过氧化物的产生能够迅速分解醛和烯醇等DNA结合因子，导致机体细胞的内源性损伤
已有研究报道，水果和蔬菜是人体抗氧化物质的主要来源。流行病学研究也证明，水果和蔬菜的摄取可能能够帮助吸烟者减少因自由基和脂质过氧化作用所引起的机体细胞损伤。诺丽是一种生长在世界上许多热带地区的常绿灌木或小乔木，具有较长的使用历史，在一些太平洋岛国及东南亚地区，诺丽被当地的人们视为重要的食品及药品资源。现有许多关于诺丽保健功效的研究报道，其中也包括提高人体免疫力及抗氧化活性等方面。欧洲联盟批准认可的诺丽产品——诺丽酵素果汁已被一些国家的运动员日常保健使用，以其机体的抗氧化能力，从而提高运动耐力。此外，也有研究报道表明诺丽酵素果汁能够用于由于四氯化碳引起的小鼠肝损害细胞的修复。因此在先前研究的基础上，有理由相信诺丽果汁能够减轻吸烟者由于自由基产生及脂质过氧化所导致的机体细胞损伤，为了证明这一科学预测，我们对诺丽果汁在重度吸烟者体内的抗氧化活性进行本项研究。
2实验方法
本研究试验方案已得到伊利诺伊州立大学罗克福德医学院伦理审查委员会批准，本研究符合赫尔辛基宣言，所有参与者的均已签署知情同意书。成人重度吸烟者被招募参加本研究。招募标准为：年龄18至65岁，吸烟者每天吸烟20支以上，吸烟史超过一年，并没有同时使用，或在过去三个月中使用处方药或抗氧化维生素，饮食中可以包括水果和蔬菜。男性和女性供试者比例相同。
本研究使用诺丽酵素果汁，安慰剂则由葡萄和蓝莓果汁以及天然奶酪混合成。研究中，供试者被随机分配到三个组中，即对照组（每日摄取118 mL安慰剂）、实验组1（每日摄取29.5 mL诺丽果汁）、实验组2（每日摄取29.5 mL诺丽果汁）。各组的男性对女性的比例为1:1。实验组1的供试者每日清晨空腹饮用29.5 mL诺丽果汁；实验组2的供试者每日早、晚空腹各饮用59 mL诺丽果汁。各组按照上述相应方法连续服用30天。
临床试验前后后，分别采集每位供试者10毫升血液，离心处理以收集血浆，用以检测SAR和 LOOH含量，进而将实验前后的数值进行比较，以示差异。
供试者血液中的SAR含量可由四氮唑硝基蓝（TNB）检测法确定：SAR与TNB反应生成甲臜蓝，其光吸收波长为602 nm。SAR水平的降低将导致甲臜蓝合成减少，吸光度下降。LOOH的测定可采用无色亚甲基蓝法（LMB）。血浆样品加入LMB试剂后在室温下静置5分钟，在血红蛋白的存在下，LOOH无色亚甲蓝被氧化亚甲基蓝，其光吸收波长为660nm。测定此吸收波长处的吸光度，通过绘制标准曲线即可计算得到LOOH的浓度。
针对本研究所得到的实验数据，采用统计学的分析方法进行数据处理，以显示供试者在临床试验前后血液中超氧化物阴离子自由基(SAR)及脂质过氧化物（LOOH）监测指标的差异。各组试验完成率均高于73%，且各实验组内没有较大的数据波动。所有的实验数据均进行平均值及标准方差的计算，以确保数据的准确性。
3结果与讨论
实验对象，即重度吸烟者身体状况、生理指征及性别比例等基本接近，其中白人占80 - 89％，非裔美国人占9.4—18％，各组的平均年龄从37至43岁不等，每人每日平均吸烟量为26-29根。临床试验中，没有因诺丽果汁及安慰剂引起的毒副作用。
实验前后供试者体内的超氧化物阴离子自由基(SAR)及脂质过氧化物（LOOH）值参见表1，实验开始前，各组之间SAR和LOOH值相对接近，对照组在实验前后SAR和LOOH含量没有发生明显的变化。与对照组比较，实验组供试者体在临床试验后体内SAR的水平均有所降低，实验组1（每日摄取29.5 mL诺丽果汁）与实验组2（每日摄取29.5 mL诺丽果汁）的重度吸烟供试者血液中SAR分别下降了26.9%和30.8%，LOOH水平在两组实验组供试者血液中分别下降了24.5%和27.3%。
表1 重度吸烟者试验前后血液中自由基水平
超氧化物阴离子自由基(SAR)及脂质过氧化物（LOOH）在男性和女性供试者体内变化的比较见表2。LOOH的下降水平在每组男性和女性中以及两实验组之间基本上是相同的，通过该结果还可以表明TNJ诺丽果汁每日剂量为29.5毫升，是其抗氧化作用的阈值。
表2 男性与女性重度吸烟者试验前后血液中自由基水平
值得一提的是，对照组供试者所摄取安慰剂中包含葡萄和蓝莓果汁等水果的成分物质，这些水果已被证明具有抗氧化作用，因此，虽然作为试验对照，但仍然可以与诺丽果汁在抗氧化作用方面进行一定的比较。临床试验结束后，对照组与实验组供试者血液中的SAR至未显示明显的差异，可能与安慰剂中存在抗氧化物质成分相关，其具有清除SAR的作用。安慰剂中葡萄和蓝莓果汁等水果的成分物质虽然在本临床试验中使得对照组体内SAR值略有下降，但由于其清除
能力有限，不足以降低重度吸烟者血液中的SAR水平。因此，将其设置为对照组，不会影响诺丽果汁在重度吸烟者体内降低SAR水平作用的事实。
本研究中，诺丽果汁对血浆LOOH浓度的影响作用效果显著，临床试验结束后检测发现实验组供试者血液中LOOH水平较实验前明显下降。SAR在超氧化物歧化酶（SOD）的作用下被转化为过氧化物H2O2，而多不饱和脂肪酸的羟基自由基经氧化作用形成脂质过氧化物。实验组供试者LOOH 降低的水平强于SAR，显示出诺丽果汁抗氧化作用的潜在目标靶点存在一定的差异，诺丽果汁的作用靶点很有可能是羟基自由基基团，其作用的相关机理性还有待进一步研究。
4研究结论
人体血液中超氧化物阴离子自由基(SAR)及脂质过氧化物（LOOH）已成为与吸烟有关的退行性疾病发生的重要生物标志物。正如上文所提到的，分子流行病学研究已经证明，吸烟者体内的SAR和LOOH水平明显高于不吸烟者。本研究证明诺丽果汁能够在重度吸烟者体内发挥良好的抗氧化作用。
(选自英国《化学核心杂志》，3: 13-17，刘洋译。)
